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描述:測(cè)定意義:LDH(EC 1.1.1.27)廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中,是糖酵解途徑的末端酶,催化丙酮酸與乳酸之間的可逆反應(yīng),伴隨著NAD+/NADH之間互變。測(cè)定原理:LDH催化NAD+氧化乳酸生成丙酮酸,丙酮酸進(jìn)一步與2, 4 - 二硝基苯肼作用生成丙酮酸二硝基苯腙,在堿性溶液中顯棕紅色,顏色深淺與丙酮酸濃度成正比。乳酸脫氫酶(LDH)檢測(cè)試劑盒
標(biāo)題:乳酸脫氫酶(LDH)檢測(cè)試劑盒
產(chǎn)品概述
乳酸脫氫酶(LDH)檢測(cè)試劑盒
需自備的儀器和用品:
可見(jiàn)分光光度計(jì)、恒溫水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1 mL玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
試劑的組成和配制:
提取液:30mL×1瓶, 4℃保存;
試劑一:液體15 mL×1瓶, 4℃保存;
試劑二:粉劑×1支,-20℃保存,用時(shí)加入1.3 mL雙蒸水充分溶解備用,配好后-20 ℃保存,可保存兩周,禁止反復(fù)凍融;
試劑三:液體15 mL×1瓶,4℃保存;
試劑四:液體50 mL×1瓶L,4℃保存;
樣品測(cè)定的準(zhǔn)備:
1、 細(xì)菌、細(xì)胞或組織樣品的制備 :
細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞:先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),棄上清,按照每200萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入400μL提取液,超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(功率20%,超聲3秒,間隔10秒,重復(fù)30次)。8000g,4℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。
組織:稱(chēng)取約0.1g組織,加入1mL提取液或者生理鹽水進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。
2、血清(漿)樣品:直接檢測(cè)。
測(cè)定操作表(在1mL EP管中反應(yīng)):
試劑名稱(chēng)(μL) | 測(cè)定管 | 對(duì)照管 |
待測(cè)樣本 | 50 | 50 |
試劑一 | 250 | 250 |
試劑二 | 50 |
|
蒸餾水 |
| 50 |
充分混勻,37℃(哺乳動(dòng)物)或25℃(其它物種)水浴15min
試劑三 | 250 | 250 |
充分混勻,37℃(哺乳動(dòng)物)或25℃(其它物種)水浴15min
試劑四 | 750 | 750 |
充分混勻,室溫靜置3分鐘,450 nm下測(cè)定吸光度
注意事項(xiàng):
1、粗酶液的提取必須在0℃ - 4℃中操做完成,以防止酶變性失活。測(cè)定過(guò)程中樣本﹑試劑二和標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液必須在冰上放置。
3、由于每個(gè)樣本都要做測(cè)定管和對(duì)照管,因此本試劑盒50管可測(cè)24個(gè)樣本。
乳酸脫氫酶(LDH)檢測(cè)試劑盒
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