了解常用緩沖液配置

了解常用緩沖液配置

1)10 mM ATP
組份濃度：10 mM ATP
配制量：20 ml
配制方法：
1. 稱取121 mg Na2ATP·3H2O，加入到50 ml塑料離心管內(nèi)。
2. 加20 ml的25 mM Tris-HCl（pH8.0)，攪拌溶解。
3. 適量分成小份后，-20℃保存。

2)10×TE Buffer (pH7.4, 7.6, 8.0)
組份濃度：100 mM Tris-HCl, 10 mM EDTA
配制量：1 L
配制方法：
1. 量取下列溶液，置于1 L燒杯中。

2. 向燒杯中加入約800 ml的去離子水，均勻混合。
3. 將溶液定容至1 L后，高溫高壓滅菌。
4. 室溫保存。
3)1.5 M Tris-HCl (pH8.8)
組份濃度：1.5 M Tris-HCl
配制量：1 L
配制方法：
1. 稱量181.7 g Tris置于1 L燒杯中。
2. 加入約800 ml的去離子水，充分?jǐn)嚢枞芙狻?/span>
3. 用濃鹽酸調(diào)節(jié)pH值至8.8。
4. 將溶液定容至1 L。
5. 高溫高壓滅菌后，室溫保存。
注意：應(yīng)使溶液冷卻至室溫后再調(diào)定pH值，因?yàn)門ris溶液的pH值隨溫度的變化差異很大，溫度每升高1℃，溶液的pH值大約降低0.03個(gè)單位。
4)3 M 醋酸鈉(pH5.2)
組份濃度：3M 醋酸鈉
配制量：100ml
配制方法：
1.稱量40.8g NaAc·3H2O置于100-200ml燒杯中，加入月40ml的去離子水?dāng)嚢枞芙?/span>
2.加入冰醋酸調(diào)節(jié)pH值至5.2
3.加去離子水將溶液定容至100ml
4高溫高壓滅菌后，室溫保存。
5)PBS Buffer
組份濃度：137 mM NaCl, 2.7 mM KCl, 10 mM Na2HPO4, 2 mM KH2PO4
配制量：1 L
配制方法：
1. 稱量下列試劑，置于1 L燒杯中。

2. 向燒杯中加入約800 ml的去離子水，充分?jǐn)嚢枞芙狻?/span>
3. 滴加濃鹽酸將pH值調(diào)節(jié)至7.4，然后加入去離子水將溶液定容至1 L。
4. 高溫高壓滅菌后，室溫保存。
注意：上述PBS Buffer中無(wú)二價(jià)陽(yáng)離子，如需要，可在配方中補(bǔ)充1 mM CaCl2和0.5 mM MgCl2。
6)10 M 醋酸銨
組份濃度：10 M 醋酸銨
配制量：100 ml
配制方法：
1. 稱量77.1 g醋酸銨置于100～200 ml燒杯中，加入約30 ml的去離子水?dāng)嚢枞芙狻?/span>
2. 加去離子水將溶液定容至100 ml。
3. 使用0.22 mm濾膜過(guò)濾除菌。
4. 密封瓶口于室溫保存。
注意：醋酸銨受熱易分解，所以不能高溫高壓滅菌。
7)苯酚/氯-仿/異戊醇 (25 : 24 : 1)
配制方法：
1. 說(shuō)明：從核酸樣品中除去蛋白質(zhì)時(shí)常常使用苯酚/氯-仿/異戊醇（25 : 24 : 1)。氯-仿可使蛋白質(zhì)變性并有助于液相與有機(jī)相的分離，而異戊醇則有助于消除抽提過(guò)程中出現(xiàn)的氣泡。
2. 配制方法：將Tris-HCl平衡苯酚與等體積的氯-仿/異戊醇（24 : 1）混合均勻后，移入棕色玻璃瓶中4℃保存。
8）10％ (W/V) SDS
組份濃度：10％ (W/V)SDS
配制量：100ml
配制方法：
1.稱量10g高純度的SDS置于100-200ml燒杯中，加入約80ml的去離子水，68℃加入溶解
2.滴加濃鹽酸調(diào)節(jié)pH值至7.2
3.將溶液定容至100ml后，室溫保存。
9）2 N NaOH
組份濃度：2 N NaOH
配制量：100 ml
配制方法：
1. 量取80 ml去離子水置于100～200 ml塑料燒杯中（NaOH溶解過(guò)程中大量放熱，有可能使玻璃燒杯炸裂)。
2. 稱取8 g NaOH小心地逐漸加入到燒杯中，邊加邊攪拌。
3. 待NaOH*溶解后，用去離子水將溶液體積定容至100 ml。
4. 將溶液轉(zhuǎn)移至塑料容器中后，室溫保存。
10）2.5 N HCl
組份濃度：2.5 N HCl
配制量：100 ml
配制方法：
1. 在78.4 ml的去離子水中加入21.6 ml的濃鹽酸（11.6 N)，均勻混合。
2. 室溫保存。
11）5 M NaCl
組份濃度：5 M NaCl
配制量：1 L
配制方法：
1. 稱取292.2 g NaCl置于1 L燒杯中，加入約800 ml的去離子水后攪拌溶解。
2. 加去離子水將溶液定容至1 L后，適量分成小份。
3. 高溫高壓滅菌后，4℃保存。
11）20％ (W/V) Glucose
組份濃度：20％ (W/V) Glucose
配制量：100 ml
配制方法：
1. 稱取20 g Glucose置于100～200 ml燒杯中，加入約80 ml的去離子水后，攪拌溶解。
2. 加去離子水將溶液定容至100 ml。
3. 高溫高壓滅菌后，4℃保存。
12）Solution I(質(zhì)粒提取用)
組份濃度：25 mM Tris-HCl（pH8.0), 10 mM EDTA, 50 mM Glucose
配制量：1 L
配制方法：
1. 量取下列溶液，置于1 L燒杯中。

2. 高溫高壓滅菌后，4℃保存。
3. 使用前每50 ml的Solution I中加入2 ml的RNase A（20 mg/ml)。
13）Solution II(質(zhì)粒提取用)
組份濃度：200mM NaOH，1％(W/V)SDS
配制量：500ml
配制方法：
1.量取下列溶液，置于500ml燒杯中
10％ SDS 50ml
2N NaOH 50ml
2.加滅菌水定容至500ml，充分混勻
3.室溫保存，此溶液保存時(shí)間zui-好不要超過(guò)一個(gè)月
注意：SDS易產(chǎn)生氣泡，不要?jiǎng)×覕嚢?/span>
14）Solution III(質(zhì)粒提取用)
組份濃度：3 M KOAc, 5 M CH3COOH
配制量：500 ml
配制方法：
1. 稱量下列試劑，置于500 ml燒杯中。

2. 加入300 ml去離子水后攪拌溶解。
3. 加去離子水將溶液定容至500 ml。
4. 高溫高壓滅菌后，4℃保存。
15）0.5 M EDTA(pH8.0)
組份濃度：0.5 M EDTA
配制量：1 L
配制方法：
稱取186.1 g Na2EDTA·2H2O，置于1 L燒杯中。
2. 加入約800 ml的去離子水，充分?jǐn)嚢琛?/span>
3. 用NaOH調(diào)節(jié)pH值至8.0（約20 g NaOH)。
注意：pH值至8.0時(shí)，EDTA才能*溶解。
4. 加去離子水將溶液定容至1 L。
5. 適量分成小份后，高溫高壓滅菌。
6. 室溫保存。
16）1 M DTT
組份濃度：1 M DTT
配制量：20 ml
配制方法：
1. 稱取3.09 g DTT，加入到50 ml塑料離心管內(nèi)。
2. 加20 ml的0.01 M NaOAc（pH5.2)，溶解后使用0.22 mm濾器過(guò)濾除菌。
3. 適量分成小份后，-20℃保存。
17）

1 M Tris-HCl (pH7.4, 7.6, 8.0)
組份濃度：1 M Tris-HCl
配制量：1 L
配制方法：
1. 稱量121.1 g Tris置于1 L燒杯中。
2. 加入約800 ml的去離子水，充分?jǐn)嚢枞芙狻?/span>
3. 按下表量加入濃鹽酸調(diào)節(jié)所需要的pH值。
 

4. 將溶液定容至1 L。
5. 高溫高壓滅菌后，室溫保存。
注意：應(yīng)使溶液冷卻至室溫后再調(diào)定pH值，因?yàn)門ris溶液的pH值隨溫度的變化差異很大，溫度每升高1℃，溶液的pH值大約降低0.03個(gè)單位。