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辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的小鼠抗人IgM

描述:辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的小鼠抗人IgM
HRP經(jīng)NaIO4氧化后形成的醛化酶可與抗體分子的氨基相連,形成斯夫氏鹼,后者可進(jìn)一步用NaBH4(或乙醇胺)還原生成穩(wěn)定的酶標(biāo)記抗體。

  • 產(chǎn)品型號(hào):
  • 廠商性質(zhì):生產(chǎn)廠家
  • 更新時(shí)間:2020-06-22
  • 訪問(wèn)量:340
產(chǎn)品詳情/ PRODUCT DETAIL

標(biāo)題:辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的小鼠抗人IgM

產(chǎn)品概述

辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的小鼠抗人IgM

本產(chǎn)品僅用于研究用途,不用于人類、治療或診斷應(yīng)用。

抗體來(lái)源Mouse
克隆類型Polyclonal
交叉反應(yīng)hu
產(chǎn)品應(yīng)用WB=1:1000-10000 ELISA=1:1000-10000 IHC-P=1:100-1000 IHC-F=1:100-1000  
not yet tested in other applications.
optimal dilutions/concentrations should be determined by the end user.
分 子 量900kDa
性    狀Lyophilized or Liquid
濃    度2mg/1ml
免 疫 原Full length plasma protein: 
亞    型IgG
純化方法affinity purified by Protein A
儲(chǔ) 存 液0.01M TBS(pH7.4) with 1% BSA, 0.03% Proclin300 and 50% Glycerol.
保存條件Storage: Store at –20 oC for one year. Avoid repeated freeze/thaw cycles. The lyophilized antibody is stable at room temperature for at least one month and for greater than a year when kept at -20oC. When reconstituted in sterile distilled water or diluent supplied, theantibody is stable for at least two weeks at 2-4 °C.

 

辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的小鼠抗人IgM

 

 

經(jīng)典的過(guò)碘酸鈉法中需采用二硝基氟苯封閉HRP上殘留的α-和ε氨基基以避免酶分子之間的交聯(lián)。后來(lái)Wilson等改用在低PH下使NaIO4氧化HRP,從而省去了二硝基氟苯封閉HRP步驟。HRP經(jīng)NaIO4氧化后形成的醛化酶可與抗體分子的氨基相連,形成斯夫氏鹼,后者可進(jìn)一步用NaBH4(或乙醇胺)還原生成穩(wěn)定的酶標(biāo)記抗體。

 

主要試劑

 

1. 0.1M NaIO4:稱取241mg高碘酸鈉(廣州化學(xué)試劑廠,批號(hào)830602)溶于蒸餾水10ml中。

2. 1mM PH4.4醋酸鈉緩沖液:0.2M NaAc (1.361克/50ml) 3.7ml;0.2M HAc (0.601ml/50ml) 6.3ml;加蒸餾水至2,000ml。

3. 0.2M PH9.5碳酸鹽緩沖液:Na2CO3 0.32g;NaHCO3 0.586g;加蒸餾水至50ml,再用蒸餾水作20倍稀釋,即成0.01M PH9.5的碳酸鹽緩沖液。

4. NaBH4溶液(4mg/ml):臨用時(shí)稱取NaBH4 4mg溶于1ml蒸餾水中。

5. 其它的試劑及器材可參見(jiàn)戊二醛標(biāo)記法。

 

實(shí)驗(yàn)步驟

 

1. 稱取5mgHRP溶解于1ml蒸餾水中。

2. 于上液中加入0.2ml新配的0.1M NaIO4溶液,室溫下避光攪拌20分鐘。

3. 將上述溶液裝入透析袋中,對(duì)1mM PH4.4的醋酸鈉緩沖液透析,4℃過(guò)夜。

4. 加20μl 0.2M PH9.5碳酸鹽緩沖液,使以上醛化桯RP的PH升高到9.0-9.5,然后立即加入10mg IgG(抗體,或SPA 5mg)在1ml 0.01M碳酸鹽緩沖液中,室溫避光輕輕攪拌2小時(shí)。

5. 加0.1ml新配的4mg/ml NaBH4液,混勻,再置4℃ 2小時(shí)。

6. 將上述液裝入透析袋中,對(duì)0.15M PH7.4 PBS透析,4℃過(guò)夜。

7. 在攪拌下逐滴加入等體積飽和硫酸銨,置4℃ 1小時(shí)。

8. 3000rpm離心半小時(shí),棄上清。沉淀物用半飽和硫酸銨洗二次,ZUI后沉淀物溶于少量0.15M PH7.4的PBS中。

9. 將上述溶液裝入透析袋中,對(duì)0.15M PH7.4的PBS緩沖鹽水透析,去除銨離子后(用萘氏試劑檢測(cè)),10,000rpm離心30分鐘去除沉淀,上清液即為酶結(jié)合物,分裝后,冰凍保存。

10. 結(jié)果判定

除標(biāo)記物IgG量的計(jì)算,略有不同以外,其余均同戊二醛法。

IgG量(mg/ml)=(OD280nm-OD403nm×0.3)×0.62

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