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描述:測定原理復(fù)合體Ⅰ能夠催化NADH脫氫生成NAD+,在340nm下測定NADH的氧化速率計(jì)算出該酶活性的大小。線粒體呼吸鏈復(fù)合體Ⅰ活性檢測試劑盒
標(biāo)題:線粒體呼吸鏈復(fù)合體Ⅰ活性檢測試劑盒
產(chǎn)品概述
線粒體呼吸鏈復(fù)合體Ⅰ活性檢測試劑盒
測定意義
復(fù)合體Ⅰ(EC 1.6.5. 3)又稱NADH-CoQ 還原酶或NADH脫氫酶,廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞的線粒體中,是線粒體內(nèi)膜中大的蛋白復(fù)合物。該酶催化一對電子從NADH傳遞給CoQ,同時(shí)可使O2還原生成O2.-,是呼吸電子傳遞鏈上產(chǎn)生O2.-的主要部位。測定該酶活性,不僅可以反映呼吸電子傳遞鏈(ETC)狀態(tài),而且可以反映活性氧(ROS)生成狀態(tài)。
需自備的儀器和用品
紫外分光光度計(jì)、臺式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1mL石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
試劑的組成和配制
試劑一:25mL×1瓶,-20℃保存;
試劑二:5mL×1瓶,-20℃保存;
試劑三:0.5 mL×1瓶,-20℃保存;
試劑四:25mL×1瓶,-20℃保存;
試劑五:1 mL×1支,-20℃保存;
試劑六:粉劑×1支,-20℃保存,用時(shí)加入2mL雙蒸水,用不完的試劑仍-20℃保存。
工作液的配制:臨用前將試劑五轉(zhuǎn)移到試劑四中混合溶解。
復(fù)合體Ⅰ的提?。?/span>
測定步驟:
用蒸餾水于340nm處調(diào)零。
(1)取40μL酶液和800μL工作液加入1mL玻璃比色皿,在37℃(哺乳動(dòng)物)或25℃(其它物種)孵育5min。
(2)取出比色皿,加入60μL試劑六,混勻;立即記錄340nm處初始吸光值A1,37℃(哺乳動(dòng)物)或25℃(其它物種)中準(zhǔn)確反應(yīng)2min,記錄340nm處2min后的吸光值A2,計(jì)算ΔA=A1-A2。
線粒體呼吸鏈復(fù)合體Ⅰ活性檢測試劑盒
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