結(jié)合態(tài)淀粉合成酶（GBSS）檢測(cè)試劑盒

標(biāo)題：結(jié)合態(tài)淀粉合成酶（GBSS）檢測(cè)試劑盒

產(chǎn)品概述

結(jié)合態(tài)淀粉合成酶(GBSS)檢測(cè)試劑盒

測(cè)定原理

GBSS催化ADPG與淀粉引物(葡聚糖)反應(yīng),將葡萄糖分子轉(zhuǎn)移到淀粉引物上，同時(shí)生成ADP；進(jìn)一步通過(guò)反應(yīng)體系中添加的丙酮酸激酶、己糖激酶和6-磷酸葡萄糖脫氫酶依次催化NADP⁺還原為NADPH，其中NADPH生成量與前一步反應(yīng)生成的ADP數(shù)量呈正比，通過(guò)340nm下測(cè)定NADPH的增加量，可以計(jì)算GBSS活性。

需自備的的儀器和用品

紫外分光光度計(jì)、水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1 mL石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水。

試劑的組成和配制

提取液：液體60mL×2瓶，4℃保存；

液體一：7mL×2瓶，4℃保存；

液體二：4mL×2瓶，4℃保存；

液體三：8mL×2瓶，4℃保存；

粉劑一：2支，4℃保存；

粉劑二：2支，4℃保存；

粉劑三：2支，-20℃保存；

粉劑四：2支，4℃保存；

粉劑五：2支，4℃保存；

粉劑六：2支，-20℃保存；

粉劑七：2支，-20℃保存；

粉劑八：2支，4℃保存；

粉劑九：2支，4℃保存；

粉劑十：2支，-20℃保存；

試劑一：粉劑×1支，-20℃保存；臨用前加入500μL雙蒸水，充分溶解備用，用不完的試劑4℃保存；

試劑二：粉劑×1支，-20℃保存；臨用前加入500μL雙蒸水，充分溶解備用，用不完的試劑4℃保存；

反應(yīng)液Ⅰ的配制：臨用前取液體一、粉劑一、粉劑二和粉劑三各一支，依次把粉劑一、粉劑二和粉劑三轉(zhuǎn)移到液體一中混合溶解。這樣可以分兩批配制并且測(cè)定。

反應(yīng)液Ⅱ的配制：臨用前取液體二、粉劑四、粉劑五、粉劑六和粉劑七各一支，依次把粉劑四、粉劑五、粉劑六和粉劑七轉(zhuǎn)移到液體二中混合溶解。這樣可以分兩批配制并且測(cè)定。

反應(yīng)液Ⅲ的配制：臨用前取液體三、粉劑八、粉劑九和粉劑十各一支，依次把粉劑八、粉劑九和粉劑十轉(zhuǎn)移到液體三中混合溶解。這樣可以分兩批配制并且測(cè)定。

粗酶液制備

稱(chēng)取約0.1g組織加入1mL提取液，冰浴中勻漿。10000g ，4℃離心10min，棄上清，在沉淀中加入1mL提取液充分混勻，置冰上待測(cè)。

測(cè)定步驟

混勻，30℃保溫20 min，置沸水浴中1 min（蓋緊，防止水分散失），冰浴冷卻

混勻，30℃保溫30 min，置沸水浴中1 min（蓋緊，防止水分散失），

冰浴冷卻，10000g 常溫離心10min，取上清液

混勻后立即在340 nm波長(zhǎng)下記錄初始吸光度A1和 2min后的吸光度A2，計(jì)算ΔA=A2-A1。

注意：反應(yīng)液Ⅰ如有沉淀，加入之前要使之充分溶解混勻。

結(jié)合態(tài)淀粉合成酶(GBSS)檢測(cè)試劑盒