琥珀酸脫氫酶（SDH）檢測(cè)試劑盒

標(biāo)題：琥珀酸脫氫酶（SDH）檢測(cè)試劑盒

產(chǎn)品概述

琥珀酸脫氫酶(SDH)檢測(cè)試劑盒

測(cè)定原理

SDH催化琥珀酸脫氫生成延胡索酸，脫下的氫通過吩嗪二甲酯硫酸（PMS）傳遞還原2,6-二氯酚靛酚（DCPIP），并且在600nm處具有特征吸收峰，通過600nm吸光度的變化，測(cè)定2．6-DPIP的還原速度，代表SDH酶活性。

需自備的儀器和用品

可見分光光度計(jì)、水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1 mL玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。

試劑的組成和配制

試劑一：50mL×1瓶，-20℃保存；

試劑二：10mL×1瓶，-20℃保存；

試劑三：1mL×1支，-20℃保存；

試劑四：液體5mL×1瓶，4℃保存；

試劑五：粉劑×1支，4℃保存，臨用前加入2mL雙蒸水，用不完的試劑仍4℃保存；

試劑六：粉劑×1支，-20℃保存；臨用前加入2mL雙蒸水，用不完的試劑4℃保存。

SDH的提取

1. 準(zhǔn)確稱取0.1g組織或收集500萬細(xì)胞，加入1mL試劑一和10uL 試劑三，用冰浴勻漿器或研缽勻漿。
2. 4 ℃ 600 g離心5min。
3. 將上清液移至另一離心管中，4 ℃ 11000 g離心10min。
4. 上清液即胞漿提取物，可用于測(cè)定從線粒體泄漏的SDH（此步可選做）。
5. 在沉淀中加入200uL試劑二和2uL 試劑三，超聲波破碎（功率20％，超聲3s，間隔10s，重復(fù)30次）用于線粒體SDH活性測(cè)定。

測(cè)定步驟和加樣表

37℃(哺乳動(dòng)物)或25℃（其它物種）保溫10min左右

用蒸餾水調(diào)零后，依次加各試劑到1 mL玻璃比色皿中，在加入試劑六的同時(shí)開始計(jì)時(shí)；在600 nm波長下記錄20秒時(shí)的初始吸光度A1，比色后迅速將比色皿連同反應(yīng)液一起放入37℃(哺乳動(dòng)物)或25℃(其它物種)水浴中，準(zhǔn)確反應(yīng)1分鐘；迅速取出比色皿并擦干，600 nm下比色，記錄1分20秒時(shí)的吸光度A2，計(jì)算ΔA=A1-A2。

注意事項(xiàng)

1、測(cè)定過程中所有試劑和樣本在冰上放置，以免變性失活。

2、比色皿中反應(yīng)液的溫度必須保持37℃或25℃，取小燒杯一只裝入適量的37℃或25℃蒸餾水，將此燒杯放入37℃或25℃水浴鍋中。在反應(yīng)過程中把比色皿連同反應(yīng)液放在此燒杯中。

3、兩個(gè)人同時(shí)做此實(shí)驗(yàn)，一個(gè)人比色，一個(gè)人計(jì)時(shí)，以保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。

4、若ΔA大于0.5，需將酶液用酶提取液稀釋，使ΔA小于0.5，可提高檢測(cè)靈敏度。

琥珀酸脫氫酶(SDH)檢測(cè)試劑盒