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描述:測(cè)定意義:海藻糖廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中。由于海藻糖具有*的不同于其他碳水化合物的生物學(xué)特性,能在干旱、高溫、脫水、冷凍、高滲透壓及毒性物質(zhì)等惡劣環(huán)境下保護(hù)生物體細(xì)胞蛋白質(zhì)、脂肪、糖類、核酸等組分不受損害。測(cè)定原理:蒽酮比色法。具有靈敏度高﹑簡(jiǎn)便快捷﹑適用于微量樣品的測(cè)定等優(yōu)點(diǎn)。海藻糖含量檢測(cè)試劑盒
標(biāo)題:海藻糖含量檢測(cè)試劑盒
產(chǎn)品概述
海藻糖含量檢測(cè)試劑盒
需自備的儀器和用品:
可見分光光度計(jì)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1mL玻璃比色皿﹑研缽、濃硫酸(不允許快遞)和蒸餾水。
試劑的組成和配制:
提取液:液體 50ml×1瓶,4℃保存;
試劑一:粉劑×5瓶,4℃保存;
工作液的配制:臨用前在每瓶試劑一中加入1.5mL蒸餾水后,緩慢加入8.5mL濃硫酸,不斷攪拌,充分溶解,待用。
海藻糖提?。?/span>
1、細(xì)菌或細(xì)胞處理:收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照每200萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入400μL提取液,超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(功率20%,超聲3s,間隔10s,重復(fù)30次),室溫靜置45min,振蕩3~5次,冷卻后,8000g,常溫離心10min,取上清。
2、組織的處理:稱取約0.1g樣本,常溫研碎,加入1mL提取液,室溫靜置45min,振蕩3~5次,冷卻后,8000g,常溫離心10min,取上清。
3、血清(漿)的處理:吸取約100μL血清(漿),加入1mL提取液,室溫靜置45min,振蕩3~5次,冷卻后,8000g,常溫離心10min,取上清。
測(cè)定操作表(在1.5mLEP管中依次加入下列試劑):
試劑(μL) | 測(cè)定管 |
樣本 | 250 |
工作液 | 1000 |
混勻,100'C煮沸10 min(蓋緊,防止水分散失),自然冷卻至室溫,在620 nm 波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度值。
注意:由于工作液具有強(qiáng)腐蝕性,請(qǐng)謹(jǐn)慎操作。
海藻糖含量計(jì)算:
標(biāo)準(zhǔn)條件下測(cè)定的回歸方程為y = 8.8976x +0.0729;x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度(mg/mL),y為吸光值。
1、細(xì)菌、細(xì)胞或組織海藻糖含量計(jì)算
(1):海藻糖含量(mg/mg prot )=(A測(cè)定管-0.0729)÷8.8976 ÷蛋白濃度mg/mL。
(2):海藻糖含量(mg/g 鮮重)=(A測(cè)定管-0.0729)÷8.8976 ÷樣品鮮重g/mL。
2、血清(漿)海藻糖含量計(jì)算
海藻糖含量(mg/L)=(A測(cè)定管-0.0729)÷88.976
海藻糖含量檢測(cè)試劑盒
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