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描述:測(cè)定意義:ADH是生物體內(nèi)短鏈醇代謝的關(guān)鍵酶,催化乙醇與乙醛可逆轉(zhuǎn)換,在很多生理過程中起著重要作用。哺乳動(dòng)物ADH主要在肝臟生成,肝臟損傷導(dǎo)致ADH釋放到血清中。血清ADH活性高低反映了肝功能是否異常。乙醇脫氫酶(ADH)檢測(cè)試劑盒
標(biāo)題:乙醇脫氫酶(ADH)檢測(cè)試劑盒
產(chǎn)品概述
乙醇脫氫酶(ADH)檢測(cè)試劑盒
測(cè)定原理:
ADH催化NADH還原乙醛生成乙醇和NAD+,NADH在340nm處有吸收峰,而NAD+沒有;測(cè)定340nm 吸光度下降速率,來計(jì)算ADH活性。
自備儀器和用品:
研缽、冰、低溫離心機(jī)、紫外分光光度計(jì)/、微量石英比色皿/96孔板、可調(diào)式移液器和蒸餾水。
試劑組成和配制:
試劑一:液體×1瓶,室溫保存。
試劑二:液體×1瓶,4℃保存。臨用前把試劑三轉(zhuǎn)移到試劑二中,4℃保存。
試劑三:粉劑×1瓶,-20℃保存。
試劑四:液體×1支,4℃保存。
粗酶液提取:
1、稱取約0.1g樣品,加試劑一1ml,冰上充分研磨,16000g 4℃離心20min,取上清待測(cè)。2、血清可以直接用于測(cè)定。
ADH測(cè)定操作:
1. 分光光度計(jì)預(yù)熱30 min,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到340 nm,蒸餾水調(diào)零。
2. 試劑二在25℃水浴中保溫30 min以上。
3. 空白管:在微量石英比色皿/96孔板中依次加入20μL蒸餾水、160μL試劑二和20μL試劑四,迅速混勻后于340nm測(cè)定吸光值變化,分別記錄15s和75s時(shí)吸光值,分別記為A1和A2。△A空白管=A1-A2。空白管只需做1~2個(gè)。
4. 測(cè)定管:在微量石英比色皿/96孔板中依次加入20μL上清液、160μL試劑二和20μL試劑四,迅速混勻后于340nm測(cè)定吸光值變化,分別記錄15s和75s時(shí)吸光值,分別記為A3和A4。△A測(cè)定管=A3-A4。
乙醇脫氫酶(ADH)檢測(cè)試劑盒
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