丙酮酸激酶（PK）檢測(cè)試劑盒

標(biāo)題：丙酮酸激酶（PK）檢測(cè)試劑盒

產(chǎn)品概述

丙酮酸激酶(PK)檢測(cè)試劑盒

測(cè)定意義

PK（EC 2.7.1.40）廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中，催化糖酵解過(guò)程中的后一步反應(yīng)，是糖酵解過(guò)程中的主要限速酶之一，也是產(chǎn)生ATP的關(guān)鍵酶之一，因此測(cè)定PK活性具有重要意義。

需自備的儀器和用品

紫外分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1mL石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水

試劑的組成和配制

提取液：60mL×1瓶，4℃保存;

試劑一：液體45mL×1瓶，4℃保存；

試劑二：粉劑×1支，-20℃保存；

試劑三：粉劑×1支，-20℃保存；臨用前加入1.5mL雙蒸水充分溶解備用，用不完的試劑仍-20℃保存;

試劑四：液體×1支，4℃保存；臨用前每支加入900μL雙蒸水充分溶解備用，用不完的試劑仍4℃保存;

PK工作液的配制：臨用前將試劑二轉(zhuǎn)移至試劑一中，充分溶解待用。

樣本的前處理

1、細(xì)菌或細(xì)胞處理：收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照每200萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入400μL提取液，超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（功率200W，工作3s，間歇10s，工作35次），8000g，4℃，離心10min，取上清，置冰上待測(cè)。

2、組織處理：稱取約0.1g組織，加入1mL提取液進(jìn)行冰浴勻漿；8000g ，4℃，離心10min，取上清，置冰上待測(cè)。

3、血清（漿）樣品：直接檢測(cè)。

測(cè)定步驟

混勻，37℃（哺乳動(dòng)物）或25℃（其它物種）水浴5min

將上述試劑按順序加入1 mL石英比色皿中，加樣本的同時(shí)開始計(jì)時(shí)，在340nm波長(zhǎng)下記錄20秒時(shí)的初始吸光度A1，比色后迅速將比色皿連同反應(yīng)液一起放入37℃（哺乳動(dòng)物）或25℃（其它物種）水浴中準(zhǔn)確反應(yīng)2分鐘；迅速取出比色皿并擦干，340 nm下比色，記錄2分20秒時(shí)的吸光度A2，計(jì)算ΔA=A1-A2。

注意事項(xiàng)

1、測(cè)定過(guò)程中樣本和所有試劑在冰上放置，以免變性和失活。

2、比色皿中反應(yīng)液的溫度必須保持37℃或25℃，取小燒杯一只裝入一定量的37℃或25℃蒸餾水，將此燒杯放入37℃或25℃水浴鍋中。在反應(yīng)過(guò)程中把比色皿連同反應(yīng)液放在此燒杯中。

3、兩個(gè)人同時(shí)做此實(shí)驗(yàn)，一個(gè)人比色，一個(gè)人計(jì)時(shí)，以保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。

丙酮酸激酶(PK)檢測(cè)試劑盒