香姑多糖試劑的提取工藝

香姑多糖試劑的提取工藝

香姑多糖是從香菇粉碎的菌絲體中提取,其中富含多糖和木脂素。利用在香菇頂蓋和莖干生長之前出現(xiàn)的菌絲體,粉碎后制造的香菇制品可能可降低乙型肝炎傳染力。香菇也可刺激白細胞制造干擾素。在實驗室研究中其顯示有助于增強免疫力。

香姑多糖的分離提取：

1、實驗?zāi)康?掌握水溶醇沉法分離多糖類化合物的原理和方法。

2、實驗原理 在組織中,多糖多與蛋白質(zhì)以共價相結(jié)合,所以在生化產(chǎn)品制備工藝中,往往第一步多用酶降解蛋白質(zhì)部分或用堿使多糖—蛋白質(zhì)間的鍵裂開,以促進多糖在提取時的溶解。堿性提取可避免多糖中硫酸基團水解而破壞?，F(xiàn)多采用堿性提取的同時用蛋白質(zhì)水解酶處理組織。提取液中存在的蛋白質(zhì)可用普通蛋白質(zhì)沉淀劑使之沉淀,也可用其他方法使變性沉淀,如適當(dāng)調(diào)pH和加熱等。 試劑可與香姑多糖中的已糖及其糖醛酸起顯色反應(yīng),生成橙黃色化舍櫥,于49Ohm處比色,定量。

3、實驗材料 實驗器材 循環(huán)水式真空泵;旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀;粉碎機;恒溫水浴鍋;紗布;搪瓷缸;真空干燥器;721型分光光度計;15ml具塞試管。 實驗試劑 (1)95%乙醇;甲醇(化學(xué)純);乙mi(化學(xué)純);木瓜蛋白酶(中性);纖維素 酶;0.2 mol/L十六烷基三甲基氫氧化銨水溶液;10 mol/L 氫氧化鈉溶液;葡萄糖標準溶液(1mg/ml,10m/m]);試液。 (2)復(fù)合酶液:以PBS緩沖液做溶劑,其中蛋白水解酶濃度為8 %,纖維素酶濃度為4%; (3)溶液:稱取(AR級)10 g加水190 g溶解后,置于棕色瓶,備用。

4.實驗方法步驟

(一)香姑多糖的分離：

1、預(yù)處理:取干香菇4 g,用粉碎機粉碎或搗碎。

2、提取:將搗碎的干香菇置于250 ml三角瓶中,在攪拌的條件下加7倍量水混勻, 加熱至90℃,攪拌保溫60 min,降溫至40℃時轉(zhuǎn)移到40℃水浴保溫;并加入適量0.45 ml 復(fù)合酶(蛋白水解酶濃度為8 %,纖維素酶濃度為4%),pH值為自然(pH 6.4),攪拌反應(yīng)60 min,然后迅速升溫到90-100 ℃,滅活1min,降溫后紗布過濾,收集濾液。

3、濃縮:將以上濾液置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中,然后減壓濃縮至l/5體積時,停止?jié)饪s。

4、沉淀:將濃縮液置于搪瓷缸中,在攪拌的條件下,加1 倍量乙醇,然后靜置過夜。過濾得沉淀物,濾液再加3倍量乙醇,得沉淀物。

5、干燥:將沉淀置真空干燥器干燥,即為香姑多糖。