胞漿異檸檬酸脫氫酶（ICDHc）檢測(cè)試劑盒

標(biāo)題：胞漿異檸檬酸脫氫酶（ICDHc）檢測(cè)試劑盒

產(chǎn)品概述

胞漿異檸檬酸脫氫酶(ICDHc)檢測(cè)試劑盒

測(cè)定原理：

利用ICDHc催化NADP⁺還原成NADPH反應(yīng)，在340 nm下測(cè)定NADPH濃度的增加。

所需的儀器和用品:

紫外分光光度計(jì)、恒溫水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1 mL石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水。

試劑的組成和配制：

提取液：60mL×1瓶，4℃保存；

試劑一：液體50 mL×1瓶，4℃保存；

試劑二：粉劑×2支，4℃保存；用時(shí)每支加275μL雙蒸水充分溶解備用；

試劑三：粉劑ⅹ2支，-20℃保存；用時(shí)每支加275μL雙蒸水充分溶解備用；

樣本的前處理：

1、細(xì)菌、細(xì)胞或組織樣品的制備：

細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞：先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照每200萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入400μL提取液，超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（功率20％，超聲3s，間隔10s，重復(fù)30次）；8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測(cè)。

組織：稱取約0.1g組織，加入1mL提取液進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測(cè)。

2、血清（漿）樣品：直接檢測(cè)。

測(cè)定操作表：

將上述試劑按順序加入1 mL石英比色皿中，加樣本的同時(shí)開始計(jì)時(shí)，在340 nm波長(zhǎng)下記錄20秒時(shí)的初始吸光度A1；迅速將比色皿連同反應(yīng)液一起放入37℃(哺乳動(dòng)物)或25℃（其它物種）水浴中，準(zhǔn)確反應(yīng)2分鐘；迅速取出比色皿并擦干，記錄2分20秒時(shí)的吸光度A2。計(jì)算ΔA=A2-A1。

注意事項(xiàng)：

1、若A2-A1大于0.5，需將酶液用提取液稀釋，使A2-A1小于0.5，可提高檢測(cè)靈敏度。

2、實(shí)驗(yàn)時(shí)，試劑二、試劑三和樣本在冰上放置，以免變性和失活；試劑一37℃或25℃水浴放置。

3、比色皿中反應(yīng)液的溫度必須保持37℃或25℃，取小燒杯一只裝入一定量的37℃或25℃蒸餾水，將此燒杯放入37℃或25℃水浴鍋中。在反應(yīng)過(guò)程中把比色皿連同反應(yīng)液放在此燒杯中。

4、兩個(gè)人同時(shí)做此實(shí)驗(yàn)，一個(gè)人比色，一個(gè)人計(jì)時(shí)，以保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。

胞漿異檸檬酸脫氫酶(ICDHc)檢測(cè)試劑盒