辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的小鼠抗豚鼠IgG

標(biāo)題：辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的小鼠抗豚鼠IgG

產(chǎn)品概述

辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的小鼠抗豚鼠IgG

本產(chǎn)品僅用于研究用途，不用于人類(lèi)、治療或診斷應(yīng)用。

辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的小鼠抗豚鼠IgG

1. DAB是辣根過(guò)氧化物酶敏感、常用的底物。它產(chǎn)生強(qiáng)烈的棕色產(chǎn)物，在水和醇中不溶解。多數(shù)情況下，推薦在DAB中加入不同的金屬離子。當(dāng)加入金屬鹽如鈷、鎳至底物液中，辣根過(guò)氧化物酶可以更加敏感。此類(lèi)反應(yīng)產(chǎn)物呈暗藍(lán)灰色至黑色，且在水及醇中穩(wěn)定。DAB／金屬鹽染色應(yīng)用的組織染色范圍較廣。

2. 氯萘酚可以形成一種藍(lán)黑色產(chǎn)物。敏感性低于DAB，且產(chǎn)物可溶于醇中。它適用于當(dāng)DAB反應(yīng)形成較高背景或要求改變產(chǎn)物的顏色。

3. AEC產(chǎn)生紅色產(chǎn)物，其敏感性低于DAB，但可用于DAB反應(yīng)產(chǎn)生較高背景或要求改變產(chǎn)物顏色的試驗(yàn)。此產(chǎn)物可溶于醇，但不溶于水。

主要試劑

1. DAB需要的溶液

   DAB，0.05mol／LTris緩沖液(pH7.6)；

   0.3％(W／V)氯化鎳／水貯存液；

   30％過(guò)氧化氫；

   DPX。

2. 氯萘酚需要的溶液

   0.03％氯萘酚，用無(wú)水乙醇溶解(貯存在-20℃)，0.05mol／LTris(pH7.6)

   過(guò)氧化氫；

   Gelvatol或者M(jìn)owiol。

3. AEC需要的溶液

   0.4％AEC用N，N-二甲基甲酰胺(DMF)溶解；

   0.1mol／L乙酸鈉緩沖液(pH5.2)；

   過(guò)氧化氫；

   Gelvatol或Mowio1。

主要設(shè)備

光學(xué)顯微鏡(通常帶有照相機(jī)以便于記錄結(jié)果)。

實(shí)驗(yàn)步驟

1．DAB操作步驟

   1) 用9ml 0.05mol／LTris緩沖液(pH7.6)溶解6mgDAB；

   2) 加lml0.3％(W／V)氯化鎳／水貯存液(也可以用等量的氯化鈷替代)；

   3) 加0.1 m1 3％過(guò)氧化氫。過(guò)氧化氫一般以30％的溶液提供，貯存在4℃，此條件可以持續(xù)1個(gè)月；

   4) 如果出現(xiàn)沉淀，用濾紙過(guò)濾；

   5) 加此溶液至標(biāo)本，并孵育1-20min水洗終止反應(yīng)；

   6) 優(yōu)化：如果需要可復(fù)染；

   7) 用DPX封片。

2．氯萘酚操作步驟

   1) 氯萘酚貯存液的準(zhǔn)備：用10ml無(wú)水乙醇溶解0.3g氯萘酚，貯存于-20℃；

   2) 加100ul氯萘酚貯存液至10ml 0.05mol／LTris(pH7.6)，

   3) 加0.1ml 3％過(guò)氧化氫于水中。過(guò)氧化氫一般是以30％的溶液提供，4℃可存放1個(gè)月；

   4) 白色沉淀可用濾紙過(guò)濾去除；

   5) 加此溶液到標(biāo)本中，并在室溫孵育10～40min，水洗終止反應(yīng)；

   6) 優(yōu)化：如果需要，進(jìn)行復(fù)染，但只可使用水溶性染料；

   7) 用Gelvatol或者M(jìn)owiol封片。

3．AEC操作步驟

   1) 用lmlDMF溶解4mgAEC。AEC在DMF中穩(wěn)定，因此，可以用100mlDMF溶解0.4gAEC作為貯存液備用；

   2) 加lmlAEC溶液至15ml 0.1mol／L的乙酸鈉緩沖液(pH5.2)中，并攪拌；

   3) 加0.15ml 3％過(guò)氧化氫于水中。過(guò)氧化氫一般是30％的溶液提供，在4℃可存放1個(gè)月；

   4) 用濾紙過(guò)濾；

   5) 加此溶液到標(biāo)本中，并于室溫孵育10～40min，水洗終止反應(yīng)；

   6) 優(yōu)化：如果需要復(fù)染，只可用水溶性染料；

   7) 用Gelvatol或Mowiol封片。