組織及血液堿性磷酸酶（AKP/ALP）

標(biāo)題：組織及血液堿性磷酸酶（AKP/ALP）

產(chǎn)品概述

組織及血液堿性磷酸酶(AKP/ALP)檢測(cè)試劑盒

測(cè)定原理：

在堿性環(huán)境中，AKP/ALP催化磷酸苯二鈉生成游離酚；酚與4-氨基安替比林和鐵氰hua鉀反應(yīng)紅色亞醌衍生物，在510nm有特征光吸收；通過測(cè)定510 nm吸光度增加速率，來(lái)計(jì)算AKP活性。

自備儀器和用品：

紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器和蒸餾水。

試劑組成和配制：

試劑一：液體×1瓶，4℃保存。

試劑二：液體×1瓶，4℃避光保存。

試劑三：液體×1瓶，4℃避光保存。

試劑四：液體×1瓶，4℃避光保存，未變成藍(lán)綠色之前均可使用。

標(biāo)準(zhǔn)品：液體×1支（EP管中），2 μmol/mL酚標(biāo)準(zhǔn)液，4℃保存。

粗酶液提?。?/span>

準(zhǔn)確稱取約0.1g組織，加試劑一1mL充分研磨，4℃、10000rpm離心10min，取上清液待測(cè)。血液可直接用于測(cè)定，或者適當(dāng)稀釋后用于測(cè)定。

測(cè)定步驟：

1. 分光光度計(jì)預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到510 nm，蒸餾水調(diào)零。

2. 試劑三置于37℃水浴中預(yù)熱30 min以上。

3. 空白管：取EP管，加入4μL蒸餾水，40μL試劑二，40μL試劑三，混勻后置于37℃水浴中保溫15min；加入試劑四120μL，混勻后于510nm測(cè)定吸光度，記為A空白管。

4. 標(biāo)準(zhǔn)管：取EP管，加入4μL標(biāo)準(zhǔn)品，40μL試劑二，40μL試劑三，混勻后置于37℃水浴中保溫15min；加入試劑四120μL，混勻后于510nm測(cè)定吸光度，記為A標(biāo)準(zhǔn)管。

5. 對(duì)照管： 取EP管，加入40μL試劑二，40μL試劑三，混勻后置于37℃水浴中保溫15min；加入試劑四120μL，混勻；后加入4μL上清液，混勻后于510nm測(cè)定吸光度，記為A對(duì)照管。

6. 測(cè)定管：取EP管，加入4μL上清液，40μL試劑二，40μL試劑三，混勻后置于37℃水浴中保溫15min；加入試劑四120μL，混勻后于510nm測(cè)定吸光度，記為A測(cè)定管。

其中標(biāo)準(zhǔn)管和空白管只需做一管，測(cè)定管和對(duì)照管每個(gè)樣均需做。

注意事項(xiàng)：

1.試劑二、試劑三和試劑四均需避光保存。

2.試劑四變藍(lán)綠色后不能再使用。

3.加入試劑四后必須立即混勻，否則顯色不*。

組織及血液堿性磷酸酶(AKP/ALP)檢測(cè)試劑盒