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描述:測(cè)定意義: AKP/ALP是一種含鋅的糖蛋白酶,在堿性環(huán)境中可水解各種天然及人工合成的磷脂單酯化合物。AKP/ALP廣泛分布于人體各臟器中,以肝臟為主。 組織及血液堿性磷酸酶(AKP/ALP)檢測(cè)試劑盒
標(biāo)題:組織及血液堿性磷酸酶(AKP/ALP)
產(chǎn)品概述
組織及血液堿性磷酸酶(AKP/ALP)檢測(cè)試劑盒
測(cè)定原理:
在堿性環(huán)境中,AKP/ALP催化磷酸苯二鈉生成游離酚;酚與4-氨基安替比林和鐵氰hua鉀反應(yīng)紅色亞醌衍生物,在510nm有特征光吸收;通過測(cè)定510 nm吸光度增加速率,來(lái)計(jì)算AKP活性。
自備儀器和用品:
紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器和蒸餾水。
試劑組成和配制:
試劑一:液體×1瓶,4℃保存。
試劑二:液體×1瓶,4℃避光保存。
試劑三:液體×1瓶,4℃避光保存。
試劑四:液體×1瓶,4℃避光保存,未變成藍(lán)綠色之前均可使用。
標(biāo)準(zhǔn)品:液體×1支(EP管中),2 μmol/mL酚標(biāo)準(zhǔn)液,4℃保存。
粗酶液提?。?/span>
準(zhǔn)確稱取約0.1g組織,加試劑一1mL充分研磨,4℃、10000rpm離心10min,取上清液待測(cè)。血液可直接用于測(cè)定,或者適當(dāng)稀釋后用于測(cè)定。
測(cè)定步驟:
1. 分光光度計(jì)預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到510 nm,蒸餾水調(diào)零。
2. 試劑三置于37℃水浴中預(yù)熱30 min以上。
3. 空白管:取EP管,加入4μL蒸餾水,40μL試劑二,40μL試劑三,混勻后置于37℃水浴中保溫15min;加入試劑四120μL,混勻后于510nm測(cè)定吸光度,記為A空白管。
4. 標(biāo)準(zhǔn)管:取EP管,加入4μL標(biāo)準(zhǔn)品,40μL試劑二,40μL試劑三,混勻后置于37℃水浴中保溫15min;加入試劑四120μL,混勻后于510nm測(cè)定吸光度,記為A標(biāo)準(zhǔn)管。
5. 對(duì)照管: 取EP管,加入40μL試劑二,40μL試劑三,混勻后置于37℃水浴中保溫15min;加入試劑四120μL,混勻;后加入4μL上清液,混勻后于510nm測(cè)定吸光度,記為A對(duì)照管。
6. 測(cè)定管:取EP管,加入4μL上清液,40μL試劑二,40μL試劑三,混勻后置于37℃水浴中保溫15min;加入試劑四120μL,混勻后于510nm測(cè)定吸光度,記為A測(cè)定管。
其中標(biāo)準(zhǔn)管和空白管只需做一管,測(cè)定管和對(duì)照管每個(gè)樣均需做。
注意事項(xiàng):
1.試劑二、試劑三和試劑四均需避光保存。
2.試劑四變藍(lán)綠色后不能再使用。
3.加入試劑四后必須立即混勻,否則顯色不*。
組織及血液堿性磷酸酶(AKP/ALP)檢測(cè)試劑盒
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