異檸檬酸裂解酶（ICL）檢測試劑盒

標題：異檸檬酸裂解酶（ICL）檢測試劑盒

產品概述

異檸檬酸裂解酶(ICL)檢測試劑盒

測定原理：

ICL催化異檸檬酸降解為乙醛酸和琥珀酸，乙醛酸和NADH在LDH的作用下生成乙醇和NAD，NADH在340nm下有特征吸收峰，監(jiān)測340nm吸光度的減小速率可間接反應ICL活性。

需自備的儀器和用品：

紫外分光光度計/、臺式離心機、水浴鍋、移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水

試劑組成和配制：

提取液：液體100mL×1瓶，4℃保存；

試劑一：液體15mL×1瓶，4℃保存；

試劑二：粉劑×1瓶，-20℃保存；

試劑三：液體×1支，4℃保存；

試劑四：粉劑×1瓶，4℃保存；臨用前每瓶加入4mL雙蒸水，充分混勻待用。用不完的試劑-20℃保存；

樣本的前處理：

1、細菌或細胞處理：收集細菌或細胞到離心管內，離心后棄上清；按照每500萬細菌或細胞加入1mL提取液，超聲波破碎細菌或細胞（功率20％，超聲3秒，間隔10秒，重復30次），15000g，4℃，離心20分鐘，取上清，置冰上待測。

2、組織處理：稱取約0.1g組織，加入1mL提取液進行冰浴勻漿；15000g ，4℃，離心20分鐘，取上清，置冰上待測。

測定步驟：

1. 分光光度計或酶標儀預熱30min以上，調節(jié)波長至340nm，蒸餾水調零。
2. 樣本測定

（1）工作液的配置，將試劑二和試劑三轉移至試劑一中，充分混合溶解，置于37℃（哺乳動物）或25℃（其它物種）水浴5min；

（2）在試劑四中加入4mL雙蒸水，充分溶解待用；

（3）在微量石英比色皿或96孔板中加入10μL樣本、150μL工作液和40μL試劑四，混勻，立即記錄340nm處20s時的吸光值A1和 2min20s后的吸光值A2，計算ΔA=A1-A2。

異檸檬酸裂解酶(ICL)檢測試劑盒