線粒體呼吸鏈復(fù)合體Ⅲ活性檢測(cè)試劑盒

標(biāo)題：線粒體呼吸鏈復(fù)合體Ⅲ活性檢測(cè)試劑盒

產(chǎn)品概述

線粒體呼吸鏈復(fù)合體Ⅲ活性檢測(cè)試劑盒

測(cè)定原理

與氧化型細(xì)胞色素C不同，還原型細(xì)胞色素C在550nm有特征光吸收，因此550nm光吸收增加速率能夠反映線粒體復(fù)合體Ⅲ酶活性。

需自備的儀器和用品

可見分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。

試劑的組成和配制

試劑一：25mL×1瓶，-20℃保存；

試劑二：5mL×1瓶，-20℃保存；

試劑三：0.5 mL×1支，-20℃保存；

試劑四：液體20mL×1瓶，4℃保存；

試劑五：粉劑×1支，-20℃保存；

試劑六：液體2.5mL×1瓶，-20℃保存；

工作液的配制：將試劑五轉(zhuǎn)移到試劑四中混合溶解。

線粒體復(fù)合體Ⅲ提?。?/span>

1. 準(zhǔn)確稱取0.1g組織或收集500萬(wàn)細(xì)胞，加入1mL試劑一和10uL 試劑三，用冰浴勻漿器或研缽勻漿。
2. 將勻漿600g，4℃離心5min。
3. 將上清液移至另一離心管中，11000g，4℃離心10min。
4. 上清液即胞漿提取物，可用于測(cè)定從線粒體泄漏的復(fù)合體Ⅲ（此步可選做）。
5. 在沉淀中加入200uL試劑二和2uL 試劑三，超聲波破碎（功率20％，超聲3秒，間隔10秒，重復(fù)30次），用于復(fù)合體Ⅲ酶活性測(cè)定。

測(cè)定步驟：

1. 調(diào)零 用蒸餾水于550nm處調(diào)零。
2. 樣本測(cè)定

（1）取40μL樣本和800μL工作液于1mL玻璃比色皿中，在37℃（哺乳動(dòng)物）或25℃（其它物種）孵育5min。

（2）取出比色皿，加入100μL試劑六，混勻，立即記錄550nm處初始吸光值A1，37℃（哺乳動(dòng)物）或25℃（其它物種）中準(zhǔn)確反應(yīng)2min，記錄550nm處2min后的吸光值A2，計(jì)算ΔA=A2-A1。

線粒體呼吸鏈復(fù)合體Ⅲ活性檢測(cè)試劑盒