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描述:測定意義: GDH(EC 1.4.1.2)廣泛分布植物中,和谷氨酸合成酶(GOGAT)共同參與谷氨酸的合成,在氨同化和轉(zhuǎn)化成有機氮化合物的代謝中起重要作用。測定原理:GDH催化NH4+、α-酮戊二酸和NADH,生成谷氨酸和NAD+,引起340nm吸光度下降。通過測定340nm吸光度的下降速率,計算GDH活性谷氨酸脫氫酶(GDH)檢測試劑盒
標題:谷氨酸脫氫酶(GDH)檢測試劑盒
產(chǎn)品概述
谷氨酸脫氫酶(GDH)檢測試劑盒
需自備的儀器和用品:
紫外分光光度計、臺式離心機、水浴鍋、移液器、1mL石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
試劑組成和配制:
提取液:液體60mL×1瓶,4℃保存;
試劑一:液體60mL×1瓶,4℃保存;
試劑二:粉劑×1支,4℃保存;
試劑三:粉劑×1支,4℃保存;
試劑四:粉劑×1支,-20℃保存。
粗酶液提取:
1、收集細菌或細胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照每500萬細菌或細胞加入1mL提取液,超聲波破碎細菌或細胞(功率20%,超聲3秒,間隔10秒,重復(fù)30次);8000g 4℃離心10分鐘,取上清,置冰上待測。
2、稱取約0.1g組織,加入1mL提取液進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10分鐘,取上清,置冰上待測。
測定步驟:
(1)工作液的配制:臨用前將試劑二、三、四轉(zhuǎn)移到試劑一中混合溶解,置于37℃(哺乳動物)或25℃(其它物種)水浴5min;
(2)取1mL工作液和0.05mL樣本于1mL比色皿中,混勻,加樣本的同時開始計時,在340 nm波長下記錄20秒時的初始吸光度A1和5分20秒時的吸光度A2,計算ΔA=A1-A2。
谷氨酸脫氫酶(GDH)檢測試劑盒
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