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NAD-蘋果酸酶(NAD-ME)檢測試劑盒

描述:測定原理:
NAD-ME催化NAD+還原成NADH,在340nm下測定NADH增加速率。
NAD-蘋果酸酶(NAD-ME)檢測試劑盒

  • 產(chǎn)品型號:
  • 廠商性質(zhì):生產(chǎn)廠家
  • 更新時(shí)間:2019-11-07
  • 訪問量:573
產(chǎn)品詳情/ PRODUCT DETAIL

標(biāo)題:NAD-蘋果酸酶(NAD-ME)檢測試劑盒

產(chǎn)品概述

NAD-蘋果酸酶(NAD-ME)檢測試劑盒

測定意義:

ME廣泛存在于微生物、培養(yǎng)細(xì)胞、動(dòng)物和植物胞漿中,尤其在植物組織中活性較高。ME催化蘋果酸氧化脫羧的可逆反應(yīng),產(chǎn)生丙酮酸和CO2,以及伴隨NAD(P)+的還原反應(yīng),是蘋果酸代謝的關(guān)鍵酶。ME活性與生物合成和抗氧化密切相關(guān)。近年來植物ME活性測定較多,已經(jīng)成為抗氧化研究的熱點(diǎn)。根據(jù)輔酶專一性和對底物特異性的不同,可將ME分為NAD-ME(EC1.1.1.38)NADP-ME(EC1.1.1.40)。

需自備的儀器和用品:

紫外分光光度計(jì)、水浴鍋、臺式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1 mL石英比色皿和蒸餾水。

試劑的組成和配制:

提取液:60mL×1瓶,4保存。;

試劑一:液體40mL×1瓶,4℃保存;

試劑二:液體20mL×1瓶,4℃保存;

試劑三:粉劑×2支,4℃保存;用時(shí)每支加1mL雙蒸水充分溶解備用;

試劑四:粉劑×2支,-20℃保存;用時(shí)每支加500μL雙蒸水充分溶解備用。

樣本的前處理:

1、細(xì)菌、細(xì)胞或組織樣品的制備

細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞:先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),棄上清,按照每200萬細(xì)菌或細(xì)胞加入400μL提取液,超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(功率20%,超聲3s,間隔10s,重復(fù)30次)。8000g 4離心10min,取上清,置冰上待測。

組織:稱取約0.1g組織,加入1mL提取液進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4離心10min,取上清,置冰上待測。

2、血清(漿)樣品:直接檢測。

測定操作表:

試劑名稱(μL

測定管

試劑一

600

試劑二

225

試劑三

30

試劑四

15

樣本

30

將上述試劑按順序加入1 mL石英比色皿中,混勻后在37℃(哺乳動(dòng)物)或25℃(其它物種),340 nm波長下記錄初始吸光度A1和反應(yīng)1min的吸光度A2,計(jì)算ΔA=A2-A1。

注意事項(xiàng):

1、若A2-A1大于0.5,需將酶液用提取液稀釋,使A2-A1小于0.5,可提高檢測靈敏度。

2、實(shí)驗(yàn)時(shí),試劑三、試劑四和樣本在冰上放置,以免變性和失活。試劑一3725水浴放置。

3、比色皿中反應(yīng)液的溫度必須保持37℃25℃,取小燒杯一只裝入一定量的37℃25℃蒸餾水,將此燒杯放入37℃25℃水浴鍋中。在反應(yīng)過程中把比色皿連同反應(yīng)液放在此燒杯中。

4、兩個(gè)人同時(shí)做此實(shí)驗(yàn),一個(gè)人比色,一個(gè)人計(jì)時(shí),以保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。

NAD-蘋果酸酶(NAD-ME)檢測試劑盒

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