乳酸脫氫酶細胞毒性檢測試劑盒使用原理及注意事項

 乳酸脫氫酶細胞毒性檢測試劑盒使用原理及注意事項

產品名稱：乳酸脫氫酶細胞毒性檢測試劑盒

英文名稱：LDH Cytotoxicity Assay Kit

產品規(guī)格：500T

儲存條件：-20℃

乳酸脫氫酶細胞毒性檢測試劑盒(LDH Cytotoxicity Assay Kit)，也稱乳酸脫氫酶檢測試劑盒(LDH Assay Kit)或乳酸脫氫酶釋放檢測試劑盒(LDH Release Assay Kit)，是一種基于diaphorase催化的INT顯色反應，通過比色法檢測細胞毒性時釋放的乳酸 脫氫酶活性或檢測其它樣品中的乳酸脫氫酶活性的試劑盒。

本試劑盒可以用于常規(guī)的乳酸脫氫酶活性的檢測，更常用于以LDH釋放為指標的細胞毒性檢測。同時，基于細胞總乳酸脫氫酶活性的檢測，本試劑盒也可以用于檢測細胞增殖和細胞毒性檢測。

細胞凋亡或壞死而造成的細胞膜結構的破壞會導致細胞漿內的酶釋放到培養(yǎng)液里，其中包括酶活性較為穩(wěn)定的乳酸脫氫酶(lactate dehydrogenase, LDH)。通過檢測從質膜破裂的細胞中釋放到培養(yǎng)液中的LDH的活性，就可以實現對細胞毒性的定量分析。LDH釋放被看做細胞膜完整性的重要指標，并被廣泛用于細胞毒性檢測。LDH釋放被認為是以前使用放射性的51Cr標記細胞，隨后通過51Cr釋放進行 細胞膜完整性檢測的安全有效的替代方法。

本試劑盒的基本原理是，在乳酸脫氫酶的作用下，NAD+被還原生成NADH，NADH和INT (2-p-iodophenyl-3-nitrophenyl tetrazolium chloride)被硫辛酰胺脫氫酶(diaphorase)催化反應生成NAD+和強生色物甲臜(formazan)，在490nm波長下產生吸收峰，從而可以通過比色來定量乳酸脫氫酶的活性。吸光度與乳酸脫氫酶活性成線性正相關

注意事項：

1、冷凍會使樣品中部分乳酸脫氫酶失活，4℃可放置2-3天。建議樣品準備好后盡量當天完成測定。
2、如果檢測細胞培養(yǎng)液中的乳酸脫氫酶，由于血清含有乳酸脫氫酶，建議血清的使用濃度不要超過1%，并最好使用熱滅活血清。如果一定需要使用10%血清，在檢測時一定要設置沒有細胞，但加入了相同體積培養(yǎng)液的對照孔，以用于消除背景。
3、細胞過度生長、密度過高、離心速度過大、培養(yǎng)箱內外溫差過大，都會造成細胞釋放乳酸脫氫酶增加。
4、如果希望進行乳酸脫氫酶活性的絕對定量，用戶需自備乳酸脫氫酶標準品。
5、為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
7、本產品僅供科研實驗用，不做其它用途。不得存放于普通住宅內