明膠B型溶液的制備經(jīng)驗

明膠B型溶液的制備經(jīng)驗

明膠凍干粉室溫密封保存保持數(shù)年穩(wěn)定。但在空氣中加熱到100°C，會膨脹變軟，解聚產(chǎn)生一種碳質(zhì)并伴隨吡啶堿類和氨氣的產(chǎn)生。＜35-40°C明膠膨脹且吸收5~10倍體積的水產(chǎn)生凝膠。明膠溶于甘油和醋酸，在熱水比冷水溶解性強。幾乎不溶于大多數(shù)有機溶劑比如醇類、氯仿、二硫化碳、四氯化碳、酯類、苯類、酮類和油。

一、明膠溶液的制備

1.1明膠的溶解

根據(jù)實驗所需的明膠濃度，稱取適量明膠粉末，加入含雙蒸水或PBS緩沖液的容器內(nèi)，按照以下兩種方法之一：1）明膠經(jīng)10 min浸泡后，用熱水浴加熱（溫度不要超過70℃），攪拌直至*溶解；2）明膠經(jīng)10 min浸泡后用小火加熱（溫度不要超過70℃），并不斷攪拌直至*溶解；

1.2明膠的除菌

按照以下兩種方法之一

1）高壓滅菌：將配好的明膠溶液（常用濃度0.1%~2.0%之間）裝入瓶內(nèi)，121℃，15 psi，高壓滅菌20min；

2）濾膜除菌：低濃度明膠溶液（如0.1%或0.2%）溶解后可用0.2μm濾膜除菌。但需多準(zhǔn)備幾個濾器，因為明膠相對比較難過濾。

1.3明膠的保存

明膠溶液穩(wěn)定性比較高，置于4℃保存能長期保持穩(wěn)定?！咀⒁狻浚簻囟忍岣邥黠@降低明膠強度和粘度，導(dǎo)致性能降低。

二、明膠溶液的包被方法

具體的使用濃度和使用量依據(jù)細胞類型和實驗?zāi)康亩ā?/p>

2.1用組織培養(yǎng)級別的水配制2%（w/v）的明膠溶液；

2.2 121℃，15 psi，高壓滅菌20-30 min；

2.3 按照5-10μL明膠溶液/cm2（或0.1-0.2 mg/cm2）的比例包被培養(yǎng)皿/板/瓶表面。充分覆蓋包被表面。

2.4 放置37℃培養(yǎng)箱，至少干燥2h。吸掉多余明膠溶液，用培養(yǎng)基或PBS緩沖液清洗一遍，晾干后即可使用。