乙酰甫酶A（Acetyl-CoA）樣本正確提取很關(guān)鍵

乙酰甫酶A（Acetyl-CoA）樣本正確提取很關(guān)鍵

乙酰甫酶A廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中。是生物體能源物質(zhì)代謝過(guò)程中產(chǎn)生的一種重要的中間代謝產(chǎn)物。在體內(nèi)能源物質(zhì)代謝中是一個(gè)樞紐性的物質(zhì)。糖、脂肪、蛋白質(zhì)三大營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)通過(guò)乙酰甫酶A匯聚成一條共同的代謝通路-三羧酸循環(huán)和氧化磷酸化，經(jīng)過(guò)這條通路*氧化生成二氧化碳和水，釋放能量用于ATP合成。此外，乙酰甫酶A是合成脂肪酸，酮體，及其衍生物等生理活性物質(zhì)的前體物質(zhì)。

規(guī)格：100管/96樣  50管/48樣  25管/24樣

保存：按說(shuō)明書(shū)，詳細(xì)有介紹

有效期：6個(gè)月

用途：乙酰甫酶A含量測(cè)定

需自備的儀器和用品：紫外分光光度計(jì)、水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1 mL 石英比色皿、研缽、冰和蒸

餾水。

測(cè)定原理

蘋果酸脫氫酶可催化蘋果酸和NAD生成草酰乙酸和NADH。檸檬酸合酶可催化乙酰甫酶A和草酰乙酸生成檸檬酸和甫酶A。利用蘋果酸脫氫酶和檸檬酸合酶的偶聯(lián)反應(yīng)，乙酰甫酶A含量和NADH的生成速率成正比，340nm下吸光值的上升速率反應(yīng)了乙酰甫酶A含量的高低。

乙酰輔酶 A 的提取

1、細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞：先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量（104個(gè)）：試劑一體積（mL）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL 試劑一），超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴，功率 20％或 200W，超聲 3s，間隔 10s，重復(fù) 30 次）；8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測(cè)。

2、組織：按照組織質(zhì)量（g）：試劑一體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1mL 試劑一），進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測(cè)