醋酸纖維素薄膜電泳實驗會遇到的問題

醋酸纖維素薄膜電泳實驗會遇到的問題

1. 電泳圖譜不齊或分離不良
這是電泳分析中常見的問題，多數(shù)是由于血清滴加不均勻或滴加過多，也有因薄膜質(zhì)量不合要求所致。點樣這一步非常關(guān)鍵，一定要按操作步驟進行。首先選擇質(zhì)勻、孔細、染料吸附少的薄膜充分浸透緩沖液至濕度均勻無干白點。然后將濾紙吸去薄膜表面的多余水份，使薄膜含水量飽和均勻，這樣才能防止薄膜表面液體含量不均，水份移動而引起標(biāo)本移位。

點樣前注意關(guān)閉門窗和風(fēng)扇，因空氣流通快可使標(biāo)本和水份蒸發(fā)而影響電泳圖形。點樣要力求做到均勻迅速，有報道，在實踐中把加樣器干沾血清，改為沾取標(biāo)本前先浸入蒸餾水中沾濕用吸水紙吸干后再沾血清，這樣加樣器內(nèi)均勻沾取血清的效果較干沾為佳。
2. 電泳圖譜出現(xiàn)條痕
問題是由于點樣后薄膜過干，或因電泳槽密閉性不良，或電流過大，溫度升高，薄膜水份蒸發(fā)干燥而造成的。因此薄膜一定要充分浸透后才能點樣，并注意檢查電泳槽是否蓋緊，電泳槽要放在遠離光源熱源的陰涼之處。

在電泳過程中隨時觀察電壓電流的變化，因通電后產(chǎn)生一定的熱量，電流會有所增加?？刂齐妷?00~110 V，電流0.5~0.6 mA/cm，電泳時間一般冬長夏短，以區(qū)帶展開3.5~4 cm 即可（另加一條溴酚藍預(yù)染血清，同樣操作，指示區(qū)帶展開的距離）。
3. 區(qū)帶拖尾或區(qū)帶過于緊密
緩沖液的離子強度低于0.05即出現(xiàn)區(qū)帶拖尾現(xiàn)象，離子強度>0.075則區(qū)帶過于緊密。此時需要檢查更換緩沖液。常規(guī)操作一般使用連續(xù)電泳鹽緩沖液pH8.6，離子強度0.06。電泳槽中緩沖液經(jīng)10次使用后，不應(yīng)簡單地采取交換電極的方法，而是將緩沖液取出重新混合過濾后，再進行使用，一般用4個周期后需更換新液。

4. 區(qū)帶一邊長一邊短呈現(xiàn)扭曲現(xiàn)象
這是薄膜兩邊電阻不一樣，電阻大的一邊電流小，速度慢，區(qū)帶展開短。造成這種現(xiàn)象的原因是薄膜未緊壓在電泳槽的濾紙橋上，使薄膜接觸不良而增大了電阻。在操作過程中，一定要注意使薄膜兩端緊壓在濾紙橋上。
5. γ球蛋白區(qū)帶倒退
這是電滲作用引起的?？缮唿c樣端的緩沖液面高度或適當(dāng)加大電流量克服之。
6. 染色后白蛋白中間色淺
有些同學(xué)在實驗中往往急于求成，染色時間未到便匆忙取出薄膜漂洗，結(jié)果造成了白蛋白區(qū)帶中間色淺的現(xiàn)象。造成這種現(xiàn)象的另一個原因是白蛋白含量過高?？稍黾尤旧珪r間或減少點樣量解決之。
7. 染色后區(qū)帶清晰度不良
陳舊標(biāo)本可使區(qū)帶分離清晰度大為降低。應(yīng)盡量當(dāng)日標(biāo)本當(dāng)日做，不超過2天。另外標(biāo)本不可溶血，因溶血標(biāo)本中血紅蛋白與β球蛋白的電泳區(qū)帶相重迭?？稍斐?beta;球蛋白含量升高而蛋白質(zhì)含量相對減少的結(jié)果。
8. 白蛋白區(qū)帶染色不均并有空泡
這是染色液陳舊所致，染色液存放和使用過久，會降低蛋白質(zhì)結(jié)合染料的能力。發(fā)現(xiàn)正在使用的染液已陳舊時，應(yīng)立即全部棄去，更換新液。
9. 透明時膜發(fā)白不能*透明
薄膜未干或透明液中醋酸含量不足可造成膜發(fā)白而不能達到透明的目的，應(yīng)將薄膜晾干，適當(dāng)增加透明液的醋酸濃度。
10. 透明時膜溶解
室內(nèi)溫度過高或透明液醋酸濃度過高均可使膜溶解?？刹捎眠m當(dāng)降低透明液醋酸濃度的辦法來解決。