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培養(yǎng)基配制過程各環(huán)節(jié)的要求

更新時間:2020-10-14      瀏覽次數:404

培養(yǎng)基配制過程各環(huán)節(jié)的要求

 

基本原理

正確掌握培養(yǎng)基的配制方法是從事微生物學實驗工作的重要基礎,由于微生物種類及代謝類型的多樣性,因而用于培養(yǎng)微生物培養(yǎng)基的種類也很多,它們的配方及配制方法雖各有差異。但一般培養(yǎng)基的配制程序卻大致相同,例如器皿的準備,培養(yǎng)基的配制與分裝,棉塞的制作,培養(yǎng)基的滅菌,斜面與平板的制作以及培養(yǎng)基的無菌檢查等基本環(huán)節(jié)大致相向。

三、實驗材科

(一)藥品

待配各種培養(yǎng)的組成成分,瓊脂,1mol/L NaOH溶液,1mol/l (升,統(tǒng)一用大寫)HCl溶液。

(二)儀器

天平或臺秤,高壓蒸汽滅菌鍋。

(三)玻璃器皿

移液管、試管、燒杯、量筒、錐形瓶、培養(yǎng)皿、玻璃漏斗等。

(四)其他物品

藥匙、稱量紙、pH試紙、記號筆、棉花、紗布、線繩、塑料試管蓋、牛皮紙、報紙等。

四、實驗內容

(一)玻璃器皿的洗滌和包裝

1.玻璃器皿的洗滌

玻璃器皿在使用前必須洗刷干凈。將錐形瓶、試管、培養(yǎng)皿、量筒等浸入含有洗滌劑的水中,用毛刷刷洗,然后用自來水及蒸餾水沖凈。移液管先用含有洗滌劑的水浸泡。再用自來水及蒸餾水沖洗,洗刷干凈的玻璃器皿置于烘箱中烘干后備用。

2.滅菌前玻璃器皿的包裝

(1)培養(yǎng)皿的包裝 培養(yǎng)皿由一蓋—底組成一套??捎脠蠹垖滋着囵B(yǎng)皿包成一包,或者將幾套培養(yǎng)皿直接置于特制的鐵皮圓筒內,加蓋滅菌。包裝后的培養(yǎng)皿須經滅菌之后才能使用。

(2)移液管的包裝 在移液管的上端塞入—小段棉花(勿用脫脂棉)。它的作用是避免外界及口中雜菌吹入管內,并防止菌液等吸入口中。塞入此小段棉花應距管口約0.5cm左有。棉花自身長度約1~1.5cm。塞棉花時,可用一外圈拉直的曲別針,將少許棉花塞入管口內。棉花要塞得松緊適宜,吹時以能通氣而又不使棉花滑下為準。

先將報紙裁成寬約5cm左右的長紙條,然后將已塞好棉花的移液管放在長條報紙的一端,約成45度角,折疊紙條包住,用左手握住移液管身,右手將移液管壓緊,在桌面上向前搓轉,以螺旋式包扎起來。上端剩余紙條,折疊打結,準備滅菌。

(二)液體及固體培養(yǎng)基的配制過程

1.液體培養(yǎng)基配制

(1)稱量一般可用1/100粗天平稱量配制培養(yǎng)基所需的各種藥品。先按培養(yǎng)基配方計算各成分的用量,然后進行準確稱量。

(2)溶化 將稱好的藥品置于一燒杯中,先加入少量水(根據實驗需要可用自來水或蒸餾水),用玻棒攪動,加熱溶解。

(3)定容 待全部藥品溶解后,倒入一量筒中,加水至所需體積。如某種藥品用量太少時,可預先配成較濃溶液,然后按比例吸取一定體積溶液,加入至培養(yǎng)基中。

(4)調pH 一般用pH試紙測定培養(yǎng)基的pH。用剪刀剪出一小段pH試紙,然后用鑷子夾取此段pH試紙,在培養(yǎng)基中蘸一下,觀看其pH范圍,如培養(yǎng)基偏酸或偏堿時,可用1mol/l NaOH或1mol/l HCl溶液進行調節(jié)。調節(jié)pH時,應逐滴加入NaOH或HCl溶液,防止局部過酸或過堿,破壞培養(yǎng)基中成分。邊加邊攪拌,并不時用pH試紙測試,直至達到所需pH為止。

(5)過濾 用濾紙或多層紗布過濾培養(yǎng)基。一般無特殊要求時,此步可省去。

2.固體培養(yǎng)基的配制

配制固體培養(yǎng)基時,應將已配好的液體培養(yǎng)基加熱煮沸,再將稱好的瓊脂(1.5%-2%)加入,并用玻棒不斷攪拌,以免糊底燒焦。繼續(xù)加熱至瓊脂全部融化,后補足因蒸發(fā)而失去水分。

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