谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT/GPT）檢測(cè)試劑盒使用說(shuō)明！

谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT/GPT）檢測(cè)試劑盒使用說(shuō)明！

產(chǎn)品名稱(chēng)：谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT/GPT）檢測(cè)試劑盒 微板法

檢測(cè)原理：谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT）在37℃及PH7.4條件下，作用于丙氨酸及a-酮戊二酸組成的底物，生成丙酮酸及谷氨酸。反應(yīng)30分鐘后（固定時(shí)間）加入2,4-二硝基苯肼（DNPH）鹽酸溶液，既中止反應(yīng)，同時(shí)DNPH與酮酸中羰基加成，生成丙酮酸苯腙。苯腙在堿性條件下呈紅棕色，于505nm比讀吸光度并計(jì)算酶活力。 

測(cè)定范圍：本試劑盒可以測(cè)定各類(lèi)動(dòng)物血清(漿)、組織及培養(yǎng)細(xì)胞、細(xì)胞培養(yǎng)液等樣本中谷丙轉(zhuǎn)氨酶活力（ALT）。

自備儀器和用品：

酶標(biāo)儀（510nm或505nm）、微量移液器、漩渦混勻器

試劑組成：

操作過(guò)程（僅供參考）

1.樣本前處理：

A.血清（漿）及其他液體待測(cè)樣本：直接取樣測(cè)定。

B.動(dòng)物組織樣本：準(zhǔn)確稱(chēng)取組織重量，按重量（g）:體積（ml）=1：9的比例，加入9倍體積的生理鹽水，冰水浴條件下機(jī)械勻漿，2500轉(zhuǎn)/分，離心10分鐘，取上清液待測(cè)。

C.培養(yǎng)細(xì)胞樣本前處理：將收集好的細(xì)胞用等滲緩沖液（推薦0.1mol/L PH7—7.4磷酸鹽緩沖液或生理鹽水）清洗1—2次；1000轉(zhuǎn)/分，離心10分鐘，棄上清，留細(xì)胞沉淀，加入勻漿介質(zhì)（推薦加入0.1mol/L PH7—7.4磷酸鹽緩沖液或生理鹽水），冰浴條件下超聲破碎或手動(dòng)勻漿，制備好的勻漿液不離心，待測(cè)。

2．操作表：

測(cè)定孔每吸取一個(gè)樣本，將吸嘴伸入孔板底部基質(zhì)液中，反復(fù)吸打混勻后

            37℃反應(yīng)30分鐘

對(duì)照孔每吸取一個(gè)樣本，將吸嘴伸入孔板底部液體中，反復(fù)吸打混勻后

        37℃反應(yīng)20分鐘

輕輕水平搖動(dòng)96孔板混勻，室溫放置15分鐘，510nm波長(zhǎng)，酶標(biāo)儀測(cè)各孔OD值，以（絕對(duì)OD值=測(cè)定孔0D值減去對(duì)照孔OD值），查標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，求得相應(yīng)的ALT/GPT活力單位。

注意事項(xiàng)：

1.比色法中常用的有賴(lài)氏（Reitman-Frankel）法及金氏法（King）法。賴(lài)氏法標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)所定單位數(shù)，是用實(shí)驗(yàn)方法和卡門(mén)氏反光光度法（速率法）作對(duì)比測(cè)定求得的。以卡門(mén)氏單位報(bào)告結(jié)果比較準(zhǔn)確。

卡門(mén)氏單位定義：1ml液體，反應(yīng)液總?cè)萘?ml，波長(zhǎng)340nm，1cm光徑，25℃，1min內(nèi)所生成的丙酮酸，使NADH氧化成NAD⁺而引起吸光度每下降0.001為一個(gè)單位（1卡門(mén)氏單位=0.482U/L,25℃）

2.一般血清標(biāo)本內(nèi)源性酮酸很少，血清對(duì)照孔吸光度值接近試劑空白孔（以雙蒸水代替血清，其他和對(duì)照孔同樣操作）。所以成批標(biāo)本測(cè)定時(shí)，一般不需要每一標(biāo)本都作本身血清對(duì)照孔，以試劑空白孔代替即可，但對(duì)嚴(yán)重脂血、黃疸或溶血血清，每份標(biāo)本應(yīng)做對(duì)照孔。

3.酶活力超過(guò)150單位時(shí)，用生理鹽水稀釋血清后重測(cè)。

4.一般的血清對(duì)照孔（或稱(chēng)標(biāo)本空白孔）的吸光度作為日常質(zhì)控的指標(biāo)之一；如相差大，可考慮a-酮戊二酸濃度、DNPH濃度及儀器等原因引起。

5.血清中ALT在室溫（25℃）可保存2天，在0--4℃可保存一周，在-25℃可保存1個(gè)月。

6.本產(chǎn)品僅供科研實(shí)驗(yàn)用，不做其它用途！