碘化丙啶（PI）兼容于各種細(xì)胞標(biāo)記技術(shù)

碘化丙啶（PI）兼容于各種細(xì)胞標(biāo)記技術(shù)

產(chǎn)品描述：科研試劑，廣泛應(yīng)用于分子生物學(xué)，藥理學(xué)等科研方面，嚴(yán)禁用于人體。核酸熒光染色劑。碘化丙啶（Propidium Iodide，PI）是一種常用的細(xì)胞核熒光染料，作為一種溴化乙錠（EB）的類似物，能夠嵌入堿基之間實現(xiàn)與DNA結(jié)合。這種結(jié)合沒有或者幾乎無序列傾向性，大約每4-5個DNA堿基對結(jié)合一個染料。PI也能與RNA結(jié)合，需要用核酸酶處理來區(qū)分DNA和RNA染色。水溶液中PI的最大激發(fā)/發(fā)射波長是493/636nm。一旦與核酸結(jié)合，熒光信號明顯增強20-30倍，最大激發(fā)波長向紅色波段遷移~30-40nm，最大發(fā)射波長向藍(lán)色波段遷移~15nm，從而使其最大激發(fā)/發(fā)射波長變?yōu)?35/617nm。PI的摩爾吸光系數(shù)相對比較低，但是其具有足夠大的斯托克司頻移來同時檢測核酸DNA和熒光標(biāo)記抗體，只需要使恰當(dāng)?shù)臑V片。PI適用于熒光顯微鏡，共聚焦顯微鏡，流式細(xì)胞儀以及熒光計分析。PI不能穿透細(xì)胞膜而被排斥在活細(xì)胞外，但是可以穿過破損的細(xì)胞膜而對核染色。利用這一特性，通常與Calcein-AM、Hoechst 33258或 Hoechst 33342等活細(xì)胞熒光探針一起使用，同時對活細(xì)胞和死細(xì)胞染色和鑒定，用于細(xì)胞凋亡相關(guān)的研究。也可以用作多重?zé)晒馊旧膹?fù)染劑，兼容于各種細(xì)胞標(biāo)記技術(shù)，包括直接或者間接的熒光抗體檢測，mRNA原位雜交，細(xì)胞結(jié)構(gòu)特異性的熒光探針檢測法以及組織染色。PI的單獨染色也可以進(jìn)行細(xì)胞周期的檢測。

PI不能通過活細(xì)胞膜，但卻能穿過破損的細(xì)胞膜而對核染色，常被用來與Calcein-AM，Hoechst 33258/33342或FDA等熒光化合物一起使用，同時對活細(xì)胞和死細(xì)胞進(jìn)行染色和鑒定，用于細(xì)胞凋亡相關(guān)研究。PI的單獨染色可以進(jìn)行細(xì)胞周期的檢測。PI適用于熒光顯微鏡，激光共聚焦顯微鏡，流式細(xì)胞儀及熒光分析儀。

使用方法：

1.   儲備液配制：將碘化丙啶粉末充分溶解于去離子水中配制成1mg/ml（1.5mM）溶液，于+4℃避光保存，可穩(wěn)定保存6個月以上。

2.   使用方法：

2.1貼壁細(xì)胞復(fù)染步驟（熒光顯微鏡檢測）

1）樣本準(zhǔn)備：根據(jù)自身樣本選擇合適的步驟固定細(xì)胞。PI染色一般在其它染色完成后再進(jìn)行。PI復(fù)染要求細(xì)胞經(jīng)透化處理。

2）RNase酶處理：若樣本使用多聚甲醛，甲醛或者戊二醛固定，則需要進(jìn)行RNase處理。若樣本用甲醇/醋酸或者丙酮固定，通常不需要此步操作。

a， 于2×SSC (0.3 M NaCl, 0.03 M sodium citrate, pH 7.0)溶液平衡樣本；

b， 將本品置于含有100 µg/mL DNase-free RNase的2×SSC溶液中37°C孵育20min；

c， 用2×SSC溶液清洗樣本3次，每次1min。

3）復(fù)染：

a，于2×SSC (0.3 M NaCl, 0.03 M sodium citrate, pH 7.0)溶液平衡樣本；

b，直接用2X SSC稀釋1mg/ml（1.5 mM）PI儲存液 1:3000，得到500 nM的PI工作液。通常添加300µL染液足夠用于一個蓋玻片細(xì)胞制片。染色1-5min。

c，2×SSC清洗幾次，流盡多余的緩沖液后，加入抗淬滅劑封片。

d，選擇熒光顯微鏡的合適濾片進(jìn)行觀察。